雙縮脲法蛋白含量測試盒

微量法 100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定，確保蛋白濃度在1～10mg/ml范圍內(nèi)。

測定意義：

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

測定原理：

強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物；紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān)，故可用來測定蛋白質(zhì)含量。該方法測定范圍為1~10mg蛋白質(zhì)，適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣品，尤其是動(dòng)物材料。

自備儀器和用品：

離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1瓶，5 mg/mL，4℃保存。

樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取：

1. 液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。

2. 組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水））

冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即待測液。（動(dòng)物樣品常常需要稀釋）

3. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

測定操作：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到540 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取0.5mL EP管，加入40μL蒸餾水，200μL試劑一，混勻后室溫靜置15 min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，記為A空白管。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取0.5mL EP管，加入40μL標(biāo)準(zhǔn)液，200μL試劑一，混勻后室溫靜置15 min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540 nm比色，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 測定管：取0.5mL EP管，加入40μL待測液，200μL試劑一，混勻后室溫靜置15 min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，記為A測定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

樣品中蛋白質(zhì)濃度計(jì)算公式：

C待測（mg/mL）= C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

                =5×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

注意事項(xiàng)：

1.樣品蛋白濃度須在1～10mg/ml范圍內(nèi)，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml須做相應(yīng)稀釋。因此測定前用1～2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確保蛋白濃度在1～10mg/ml范圍內(nèi)。

2.待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的PBS提取。該法受硫酸銨、Tris緩沖液干擾，提取液中應(yīng)不含這些物質(zhì)；否則改用BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進(jìn)口貨物，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運(yùn)作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。

雙縮脲法蛋白含量測試盒