預(yù)包被 96 孔微孔板

標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液

洗滌緩沖液

檢測試劑A

檢測試劑B

稀釋劑A

稀釋液B

TMB底物

停止解決方案

封板機(jī)

37°C培養(yǎng)箱

多道和單道移液器以及無菌移液器吸頭

噴射瓶或自動(dòng)微孔板清洗機(jī)

1.5毫升管

蒸餾水

吸附濾紙

100 毫升和 1 升量筒

酶標(biāo)儀（波長：450 nm）

ELISA 搖床

1) 標(biāo)準(zhǔn)品：用推薦體積的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液配制標(biāo)準(zhǔn)品，制成標(biāo)準(zhǔn)品溶液。然后按照實(shí)驗(yàn)方案中的說明，使用標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液對標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行系列稀釋。

2) 洗滌緩沖液：按照實(shí)驗(yàn)方案中的說明，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

3) 檢測試劑配制：計(jì)算所需工作液的總體積。分別用稀釋液A和稀釋液B按1:100稀釋檢測試劑A和檢測試劑B。

1) 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品、測試樣品和對照孔。

2) 將 50 µl 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品等分到標(biāo)準(zhǔn)孔中。

3) 將 50 µl 標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液等分到對照（零）孔中。

4) 將 50 µl 稀釋樣品等分到樣品孔中。

5) 立即向每個(gè)孔中分裝 50 µl 檢測試劑 A。 37°C 孵育 1 小時(shí)。

6）洗滌3次。

7) 將 100 µl 檢測試劑 B 分裝到每個(gè)孔中。 37°C 孵育 30 分鐘。

8）洗滌5次。

9) 將 90 µl TMB 底物等分到每個(gè)孔中。 37°C 孵育 10-20 分鐘。

10) 等分 50 µl 終止液。

11) 測量 450 nm 處的 OD。

使用前將套件組件和樣品平衡至室溫 (18 - 25 °C)。建議為每次測試?yán)L制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1. 在預(yù)涂板上分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)孔、測試樣品孔和對照（零）孔，然后記錄它們的位置。建議測量每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品至少一式兩份。

2. 將 50 µL 每種標(biāo)準(zhǔn)品、對照品和樣品添加到相應(yīng)的孔中。

3. 取下蓋子并倒掉液體。

4. 立即分裝 50 µl 檢測試劑 A 工作溶液。用蓋子密封板并在 37°C 下孵育 1 小時(shí)。

5. 取下蓋子并丟棄溶液。用 1X 清洗緩沖液清洗板 3 次。

6. 每孔加入100 µL 檢測試劑B 工作液，密封并在37°C 下孵育30 分鐘。

7. 棄去溶液并按照上一步驟中的說明用洗滌緩沖液洗滌板 5 次。

8. 將 90 µl TMB 底物等分到每個(gè)孔中。用蓋子密封板并在 37°C 下孵育 10-20 分鐘。避免暴露在光線下。孵育時(shí)間僅供參考，優(yōu)良時(shí)間應(yīng)由最終用戶確定。不要超過 30 分鐘。

9. 在每個(gè)孔中添加 50 µL 終止溶液。立即在 450 nm 處讀取。