含有抗褪色劑的封固劑——光漂白的解毒劑

什么是抗褪色溶液？

Antifadent 溶液可減少用于標記生物物種的染料的光漂白或熒光褪色。熒光染料的褪色是熒光顯微鏡（例如免疫熒光研究）中的一個特殊問題。熒光染料還用作細胞標記物，例如用于跟蹤細胞中鈣的吸收和釋放，以及用于表征細胞表面。對于高放大倍率的工作，可以使用非熒光浸油。

在熒光顯微鏡中，熒光是由高強度紫外線或可見光激發(fā)的。光的吸收形成染料的激發(fā)態(tài)（通常是單線態(tài)），這導致熒光。然而，染料的激發(fā)態(tài)可能會發(fā)生化學反應，導致其被破壞，如熒光的褪色或漂白以及隨后的圖像丟失或在測定的情況下，測量過程中信號強度的變化所證明的那樣。

為了克服這些問題，當通過熒光顯微鏡或其他檢測系統(tǒng)檢查標本時，使用抗褪色（抗漂白）溶液作為封固劑，并作為測定的添加劑。

常用的溶液是 AF1，它是一種包含在甘油 PBS（磷酸鹽緩沖鹽水）溶液中的抗褪色劑（抗漂白劑），對于檢查組織切片特別有用。

AF2 溶液含有甘油中的抗褪色劑，用戶可以選擇自己的緩沖液，AF3 是 PBS 溶液中的抗褪色劑。 AF3 對于檢查活細胞特別有用。

AF87是一種含有抗褪色劑的非熒光浸油。 CFPVOH 是用作固體封固劑的聚（乙烯醇）水溶液。 AF100 是一種抗褪色劑（抗漂白劑）解決方案，當固體封固劑中的樣本褪色（漂白）出現(xiàn)問題時，可與 CFPVOH 一起使用。

沒有一種抗褪色劑是基于對苯二胺的。所有溶液均可在室溫下儲存。

如何選擇？

這些關鍵決策因素將幫助您選擇最合適的封固劑：

1. 您需要硬化介質還是非硬化介質？

2. 如果您的系統(tǒng)具有甘油耐受性，則選擇基于甘油的產(chǎn)品，如果不是，則使用不含甘油的解決方案。

3. 這些高折射率封固劑解決方案適用于您希望消除球差影響（由蓋玻片玻璃和封固劑介質的折射率不匹配引起）的情況，該影響會導致圖像分辨率損失。

   下表說明了可用的抗淬滅劑的主要類型。

非硬化封固劑指南

甘油基

• AF1甘油-PBS 溶液含有胺類抗褪劑。

• AF1 plus DAPI 含有胺抗褪色劑和 DNA 染色劑 DAPI。

• AF2 A 甘油溶液含有胺類抗褪劑，可讓您選擇自己的緩沖溶液。

• AF4 沒食子酸正丙酯的甘油溶液。

基于高折射率甘油的解決方案

這些解決方案的折射率與蓋玻片玻璃的折射率相匹配，從而最大限度地減少球面像差的影響。此類封固劑對于通過單多光子共焦利基等技術對樣品的內部結構進行成像非常有價值，因為它可以作為有效的清潔解決方案（幾分鐘內即可發(fā)生清潔 - Sean Speese，俄勒岡健康與州立大學，個人通訊）。這些試劑的有益效果可以從下面的兩張圖中看出，可以看出在封固劑溶液內的顯著深度處獲得了高分辨率圖像。這些溶液的其他特點包括它們與水的混溶性，它們無味并且不會淬滅熒光染料的熒光（與硫代二乙醇不同，另一種建議的高折射率封固劑）并且溶液可以長期穩(wěn)定（至少 1 年）。

• CFM-1是一種甘油-PBS 緩沖溶液，折射率約為 1.52，可用于透射顯微鏡以及落射熒光顯微鏡。

• CFM-1 plus AF是一種甘油基溶液，折射率約為 1.52（室溫），含有胺類抗褪色劑

• CFM-2是甘油-三胺緩沖溶液，折射率約為 1.52（室溫），pH 值約為 8.5

• CFM-3 – 這種基于甘油的抗褪色劑含有中性 pH 值和折射率約為 1.52 的菲尼克斯抗褪色劑，也可作為透明溶液，使樣品深處的熒光染料可視化。

• CFMR2 –該產(chǎn)品設計用于與 GFP 標記的樣品一起使用。它含有一種抗褪色劑，不會使溶液脫氧，如果 GFP 不漂白，這是一個重要的特性。

不含甘油

• AF3是含有胺基抗褪劑的 PBS 溶液。

• CFPVOH是聚乙烯醇的水溶液。只要注意不要讓水蒸發(fā)，它就會保持液態(tài)。通過添加抗褪色劑水溶液 AF100 來延遲光漂白。

• AF100是胺基抗褪劑的 PBS 溶液，用作 CFPVOH 的添加劑（1 份 AF100 比 9 份 CFPVOH）。只要注意不要讓水蒸發(fā)，它就會保持液態(tài)。

• AFR3是一種PBS溶液，含有新型非胺、非酚類抗褪劑。

高折射率無甘油溶液

AF87是一種折射率為 1.52 的浸油，含有抗褪色劑。它可以用作浸油，也可以用作封固劑。由于 AF87 是一種與水不混溶的油，因此在使用封固劑之前必須對標本進行脫水。

硬化封固劑指南

硬化封固劑是含有聚合物如聚(乙烯醇)(PVOH)的水溶液。當將幾微升這些溶液移至顯微鏡載玻片上并蓋上蓋玻片時，水會緩慢蒸發(fā)，并形成穩(wěn)定的薄膜，從而固定蓋玻片。

有多種硬化封固劑可供選擇，可提供具有一定硬度范圍的薄膜。它們基于水溶性聚合物，例如聚（乙烯醇（PVOH）和聚（乙烯基吡咯烷酮）（PVP））。

為什么含有抗褪色劑的 PVOH 甘油水溶液本質上不穩(wěn)定？

PVOH 是通過聚（乙酸乙烯酯）水解產(chǎn)生的，大多數(shù) PVOH 商業(yè)樣品含有殘留（未水解）的乙酸酯基團。這些基團在儲存過程中會發(fā)生水解，通常會因添加的抗褪色劑而加速水解，這會導致 pH 值變化，更常見的是凝膠化。

后一個過程會導致不可預測的保質期。通過配制含有所需量抗褪色溶液的小體積 PVOH 溶液，您可以獲得成分和性能一致的材料，并更好地利用您購買的材料。

甘油基

• AF200是一種含有胺基抗褪劑的甘油溶液。

• AF300是一種含有酚類抗褪劑的甘油溶液。

成膜聚合物解決方案

• Tris-MWL 4-88是一種經(jīng)典、流行的封固劑溶液，基于 Mowiol® 4-88、甘油、水和 Tris-胺緩沖液。水蒸發(fā)后，形成弱至中等強度的薄膜。為了有效減少光漂白，應與 AF100、AF200 或 AF300 一起使用。

• CFPVOH是聚乙烯醇的水溶液，設計用于與甘油基防褪劑溶液 AF200 或 AF300 一起使用。蒸發(fā)后產(chǎn)生中等硬度的水膜。

不含甘油

• PVP plus 抗褪色劑是含有胺基抗褪色劑的聚（乙烯基吡咯烷酮）水溶液。該溶液可以長期穩(wěn)定，例如超過五年。

• CFPVOH plus 抗褪色劑是精心挑選的 PVOH 的水溶液，含有胺基抗褪色劑，保質期為 6 個月。

成膜聚合物解決方案

• CFPVOH是聚乙烯醇的水溶液。通過添加抗褪色劑水溶液 AF100 來延遲光漂白。 （1 份 AF100 至 9 份 CFPVOH）